根據(jù)液相色譜儀的硬件組成模塊，按照流動相經(jīng)過的順序：流動相溶劑瓶→高壓泵→進樣器→色譜柱→檢測器→廢液。逐步闡述高效液相色譜儀在日常使用中正確的維護及相關的注意事項。

1.流動相溶劑瓶

溶劑瓶是流動相的起點，通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。

1. 水相溶液

對于水相溶液來說，首要的問題是防止污染。雖然液相用的水大都經(jīng)過殺菌處理，但是細菌的生命力很頑強，在適當?shù)臏囟群凸庹涨闆r下，它們就會活躍起來，如果在流動相里加入磷酸鹽一類的添加劑，它們更是如虎添翼。所以，對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相，常換常新。

2. 有機相溶液

對于有機相溶液，可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合，瓶子里就會出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過程的發(fā)生，裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶，避免陽光直射，更換乙腈時應當棄去瓶底剩余的溶液。

3. 清洗過濾

溶劑瓶里的過濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會造成流動相吸液不暢，因此必須進行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進行超聲清洗。

4. 流動相的脫氣

脫氣的目的是為了除去流動相中溶解的氣體，使色譜泵的輸液準確，保留時間和色譜峰面積再現(xiàn)性提高;使基線穩(wěn)定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從而提高檢測器性能;減少死體積，防止填料氧化，從而保護色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。

(1) 氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高；

(2) 加熱回流法:效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染；

(3) 真空脫氣法:易抽走有機相；

(4) 超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡單。實際工作中，超聲脫氣法操作簡單，仍被廣泛應用，雖然此方法有時會引起氣體溶解度的增加，但基本上能滿足日常分析操作的要求。

2.高壓泵的保養(yǎng)

泵是液相色譜的核心，泵將流動相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中，并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。狀態(tài)正常的高壓泵是液相色譜準確分析的基礎，所以平日一定要重視對泵的維護。

很多情況下，泵的問題反映在壓力上，壓力波動又是常見的一類問題。泵正常的壓力波動通常會在2%以內(nèi)，且平穩(wěn)規(guī)律;不正常的波動通常由氣泡和鹽造成。如果流動相中的氣泡沒有被脫氣機除掉而到了泵以后，就會造成壓力波動，通常我們可以通過重新清洗(purge)流路和再次脫氣流動相加以解決。

由鹽造成的波動主要是因為流動相中加入了濃度較高的緩沖鹽，在含鹽流動相與有機相混合的時候，鹽會有微小的析出，從而導致壓力異常波動，解決這類問題可以考慮適當降低鹽的濃度。如果一定要用到此類流動相，可以考慮在有機相中加入一定比例的水，然后適當提高梯度結束的終點。

3.進樣器的保養(yǎng)

進樣器分手動和自動兩大類，雖然兩者工作模式不同，但使用的要點是基本一致的。

1. 防止交叉污染

自動進樣器比較常見的問題是交叉污染，交叉污染產(chǎn)生的原因很直接，樣品殘留在進樣針內(nèi)外表面，并隨下一次進樣進入色譜系統(tǒng)。要解決交叉污染，主要靠清洗。自動進樣器都會有洗針的功能，如果樣品濃度較高或者是吸附性比較強，一定要打開此功能；如果未打開洗針功能，污染可能已經(jīng)殘留在了針座或流通閥上，那么這兩個部件需及時超聲清洗。

出現(xiàn)在自動進樣器上的另外一個問題是峰面積重現(xiàn)性差，考慮可能與自動進樣器吸取樣品有關。首先觀察樣品的液面是不是足夠高，以保證進樣器可以吸到樣品。排除這個問題后，再察看自動進樣器的設置，對于一些粘度大的樣品，要降低自動進樣器的吸取速度。

2. 精細操作

手動進樣器的操作要點大致相同，應使用液相色譜儀平頭進樣針，進樣時插針應插到底，不使用時將針頭留在進樣器內(nèi)，使用前后都要及時清洗。

4.色譜柱的保養(yǎng)

色譜柱是化合物分離的關鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，且儀器基線平穩(wěn)。色譜柱一般比較昂貴，在平時的工作中要注意以下幾個事項：

(1) 色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強烈振蕩。安裝時要保證閥件或管路的清潔；

(2) 流動相在使用前必須進行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動相；

(3) 在滿足靈敏度的情況下，盡可能使用小進樣量。如果樣品比較“臟”，要進行凈化或提純處理；

(4) 分析結束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品，并用流動相或適當?shù)娜軇┣逑瓷V柱；

(5) 如色譜柱長期不用，應該用適當?shù)挠袡C溶劑保存并封閉或定期給柱子補充合適的流動相。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以存放于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水中。

5、檢測器的保養(yǎng)

目前市場上檢測器的種類繁多，而且各有特性。以常用的紫外(VWD)/二極管陣列(DAD)檢測器來說，這兩類都是紫外類的檢測器，雖然光路設計不同，但是本質(zhì)原理都是相同的。

1. 光源部分

檢測器中非常重要的部件是光源，光源對發(fā)射能量有要求，一旦能量衰減到一定程度，就會出現(xiàn)基線噪聲變大，靈敏度降低等一系列影響使用的問題，因此光源是一個消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h，當?shù)竭_這個時限的時候，我們就要特別關注燈的能量狀況，可以通過儀器維護軟件中自帶的“燈能量測試”功能來判斷，測試的結果會分別評估低、中、高三個波長段的能量，一旦某個波長段的測試結果顯示失敗，就表示需要更換燈。

2. 檢測池

檢測器中另一個重要部件是檢測池，也叫流通池。通常大家關心的一個問題是檢測池被堵掉，因為檢測池通常不是很耐壓，所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實上檢測池通常不太容易被堵，原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會被色譜柱攔下了，所以堵塞檢測器的東西基本都不是來自樣品的，很可能是后來“產(chǎn)生”的，比如含鹽流動相殘留在檢測池中導致鹽析出。

6 廢液的處置

液相色譜儀的廢液大部分含有有機溶劑，會對人體產(chǎn)生一定的危害，對環(huán)境也會產(chǎn)生污染，嚴禁隨意傾倒，應及時處理。目前，國內(nèi)大部分實驗室是將廢液送到專門的廢液處理站集中進行無害化處理。